酶聯免疫試劑盒大部分人在做檢測的時候，都不太注意ELISA試劑盒中檢測操作步驟，內心感覺都知道，都懂的。但就是因為這種心理，所以造成有時候的檢測結果出現失誤和錯誤的結果。生物檢測本就是個很嚴肅并且嚴謹的操作，因您的一個小小的疏忽和大意可能就會造成意想不到的錯誤。
正確的使用酶聯免疫試劑盒的步驟：
1.在使用之前要將試劑充分的混合均勻，但是要注意在搖晃的時候不要產生過多的泡沫，從而造成有太多的空氣進入試劑中，產生測試誤差。
2.根據要檢測樣品的數量來確定的板條數。每個比對的樣品和空白孔是做復孔，而樣品的數量就可以自己視情況而定，不過能用復孔的還是用復孔。將標本液體1:1稀釋后倒入50微升的反應孔中。
3.在反應孔中在加入50微升的待測樣品，然后馬上加入50微升的生物素標記抗體，蓋上模板，輕輕搖晃使其混合均勻后，在37攝氏度的恒溫下等待1小時。
4.將孔內液體甩去，加滿洗滌液，震蕩約30秒后，在甩去洗滌的液體，用紙將水吸干。這樣子重復三次。再在沒空加入80微升的親和鏈酶素-HRP，同上混合均勻后，在37攝氏度的恒溫環境下等待半小時。
5.同步驟四的洗滌方法。洗滌干凈后，在沒空中加入底物A,B各50微升，小心混合均勻，避免光照在37攝氏度下等待10分鐘。
6.取出酶標板，迅速加入終止液50微升，測定結果。在450納米的波長處檢測各個孔的OD值。
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